«Изучение механизмов цитотоксического действия и противоопухолевого эффекта тромбодефенсинов на моделях in vivo и in vitro.

В ходе работы изучены биологические эффекты (противоопухолевый и иммуномодулирующий) эндогенных пептидов, выделенных из тромбоцитов тромбодефенсинов, в составе фармакологической композиции. На 1 этапе исследований in vitro установлено наличие у исходного препарата тромбодефенсинов цитотоксического эффекта в отношении опухолевых клеток, полученных из молочных желез мышей оригинальной линии BLRB (8,17) 1 Lem, которые характеризуются высокой частотой возникновения спонтанного рака молочных желез (РМЖ) с возможным участием эндогенного MMTV-ретровируса, при отсутствии токсического действия по отношению к иммунокомпетентным клеткам (на модели спленоцитов) и клеткам периферической крови мышей. Проведена оценка влияния тромбодефенсинов на индуцированную пролиферацию лимфоидных клеток, которая значительно возросла, по сравнению со спонтанной пролиферацией в результате стимуляции цитокинами. Анализ влияния изучаемых пептидов на пролиферацию лимфоцитов периферической крови лабораторных животных в реакции бластной трансформации, индуцированной ФГА показал, что подавление пролиферации отмечено только при высоких концентрациях, независимо от используемой модели.
В исследованиях 2 этапа in vivo обнаружено наличие противоопухолевого действия у тромбодефенсинов на перевиваемых моделях опухолей молочной железы на самцах мышей линии BLRB-Rb(8,17)1Iem (с перевитой карциномой молочной железы (ErbB2)) и самках мышей линии C57BL/6 (с перевитой опухолью молочной железы wnt-1), что выражалось в торможении роста опухолевых узлов у подопытных животных при тенденции к увеличению веса мышей и процента их выживания. Морфологические исследования органов иммунной системы мышей (тимуса, селезенки и лимфатических узлов) выявили иммуномодулирующий эффект тромбодефенсинов в составе фармакологической композиции с преимущественным воздействием на Т-иммунную систему подопытных животных, что проявляется в тимусе — усиленной гиперплазией ткани железы с активным расширением мозговой зоны. В лимфатических узлах и селезенке — диффузной гиперплазией, резким расширением синусов. При этом иммуномодулирующий эффект на Т-систему подтверждается и тем, что в иммунных органах (центральных и периферических) увеличивается количество клеток лимфоидного ряда с большим участием макрофагов без формирования вторичных центров размножения, отсутствием плазматических клеток. Выявленные патоморфологические процессы в паренхиматозных органах (печени, почках, легких) у мышей, пролеченных тромбодефенсинами, были менее выражены, в сравнении с контрольными животными. При этом изменения были не специфического характера и могли быть связаны с реакцией состояния иммунной системы с последующими нарушениями обмена веществ, регуляции сосудистой системы на фоне перевитой опухоли, а также лечения тромбодефенсинами.
При исследованиях in vitro на 2 этапе работы установлено отсутствие прямого цитотоксического эффекта исследуемых эндогенных пептидов в отношении культур клеток: первичные культуры клеток рака молочной железы мышей Wnt-1 и BLRB, линии клеток рака молочной железы человека ВТ-437. Тромбодефенсины в составе фармакологической композиции не влияли на пролиферацию, дифференцировку опухолевых клеток, не изменяли клеточного цикла и не вызывали апаптоза опухолевых культур.